遺伝子操作の基本原理

出版社：	裳華房
著者：	赤坂甲次大山義彦(著)
発行日：	2013-11-05
分野：	基礎・関連科学 > 遺伝/遺伝子
ISBN：	9784758358563
電子書籍版：	2013-11-05 （ver.1.0）

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商品紹介

遺伝子操作の黎明期から現在に至るまで，日進月歩の遺伝子操作技術の進歩とともに，自ら技術を開拓し，研究を発展させてきた著者たちの実体験をもとに，遺伝子操作技術の基本原理をその初歩から解説．遺伝子操作の基本的技術の原理を化学の視点で学ぶことを通じて，最新の生命科学の論理を理解できるように努めた．

遺伝子操作の基本原理

―目次―

第 I 部　cDNAクローニングの原理
　1．mRNAの分離と精製
　2．cDNAの合成
　3．cDNAライブラリーの作製
　4．バクテリオファージのクローン化　

第 II 部　基本的な実験操作の原理
　5．プラスミドベクターへのサブクローニング　
　6．電気泳動　
　7．PCR　
　8．ハイブリダイゼーション　
　9．制限酵素と宿主大腸菌　

第 III 部　応用的な実験操作の原理
　10．PCRの応用　
　11．cDNAを用いたタンパク質合成　
　12．ゲノムの解析　
　13．遺伝子発現の解析

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第I部 cDNAクローニングの原理

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第I部 cDNAクローニングの原理

P.1
1章 mRNAの分離と精製

P.3
1.1 RNAの抽出

P.3
「実験」組織からのRNA抽出操作の概略

P.3
コラム分解されやすいRNAの生物学的意義

P.10
コラムタンパク質の変性と白濁

P.13
1.2 RNAからの多糖類の除去

P.13
1.3 オリゴ ( dT ) カラムによるmRNAの精製

P.14
「実験1」オリゴ ( dT ) カラムによるmRNA精製の概略

P.14
コラム拮抗するポリヌクレオチド2本鎖の結合力と反発力

P.17
「実験2」オリゴ ( dT ) カラムの再生の概略

P.18
「実験3」エタノール沈殿によるRNAの回収の概略

P.18
1.4 RNAの電気泳動

P.20
「実験」 RNAの電気泳動の概略

P.20
2章 cDNAの合成

P.23
2.1 溶液の交換

P.23
「実験1」エタノール沈殿による溶液の交換の概略

P.23
「実験2」ゲルろ過スピンカラムによる溶液の交換の概略

P.24
2.2 逆転写酵素によるcDNAの合成

P.31
「実験」オリゴ ( dT ) を用いた1st - strand cDNA合成の概略

P.31
2.3 2本鎖cDNAの合成

P.33
「実験」 2nd - strand cDNA合成の概略

P.33
2.4 ランダムプライマーを用いたcDNAの合成

P.37
「実験」ランダムプライマーを用いたcDNA合成の概略

P.38
コラム遺伝子組換えに用いる酵素

P.39
3章 cDNAライブラリーの作製

P.42
3.1 バクテリオファージベクター

P.42
コラム λgt10ベクターにEcoRIサイトが少ない理由

P.44
3.2 バクテリオファージベクターへの組込み

P.44
「実験1」 cDNA末端の平滑化の概略

P.44
「実験2」 cDNAの両端の脱リン酸化の概略

P.46
「実験3」アダプターの付加の概略

P.47
「実験4」バクテリオファージベクターへの組込みの概略

P.49
3.3 組換えファージDNAのウイルス化

P.50
「実験」パッケージング操作の概略

P.51
コラムタンパク質複合体の自律的構成

P.54
コラムライブラリーとは

P.54
4章バクテリオファージのクローン化

P.55
4.1 スクリーニングプレートの作製

P.55
「実験1」宿主となる大腸菌の調製の概略

P.55
「実験2」バクテリオファージ密度の測定の概略

P.57
コラム溶原化と溶菌

P.61
「実験3」クローンの増殖と培地プレート上での展開の概略

P.63
4.2 プローブの合成

P.64
「実験1」プローブのデザインの概略

P.64
「実験2」プローブの標識の概略

P.67
4.3 ブロッティング

P.69
「実験」ブロッティング操作の概略

P.70
4.4 メンブレンのブロッキング

P.72
「実験」ブロッキングの概略

P.73
4.5 ハイブリダイゼーションによるスクリーニング

P.74
「実験」ハイブリダイゼーションによるスクリーニングの概略

P.74
4.6 プローブの検出

P.76
「実験」プローブのシグナル検出の概略

P.76
4.7 cDNAのクローニング

P.78
「実験」ファージプラークの特定とクローニングの概略

P.78
4.8 発現ベクターライブラリーのスクリーニング

P.81
「実験1」抗体を用いたスクリーニングの概略

P.81
コラム可視光を吸収するから発色する

P.86
コラム発色には共役二重結合がかかわる

P.86
「実験2」 2本鎖標的配列を用いたスクリーニングの概略

P.87
4.9 クローンファージの回収とDNAの抽出

P.88
「実験1」クローンファージの回収の概略

P.88
「実験2」クローンファージからのDNA抽出の概略

P.90

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第II部基本的な実験操作の原理

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第II部基本的な実験操作の原理

P.93
5章プラスミドベクターへのサブクローニング

P.94
5.1 コンピテントセル

P.94
「実験」コンピテントセル作製法の概略

P.94
5.2 プラスミドベクターへの組換え

P.96
「実験」プラスミドベクターへのcDNAの組込みの概略

P.96
5.3 大腸菌の形質転換操作

P.99
「実験」プラスミドによる大腸菌の形質転換操作の概略

P.99
コラムペニシリンとアンピシリン

P.101
5.4 コロニーからのプラスミドの回収

P.102
「実験1」カラーセレクションの概略

P.102
「実験2」アルカリ・SDS法によるプラスミドの回収操作の概略

P.103
6章電気泳動

P.106
6.1 DNAゲル電気泳動

P.106
「実験」アガロースゲル電気泳動の概略

P.106
6.2 核酸の染色と検出

P.110
「実験」エチジウムブロマイド染色の概要

P.110
6.3 アガロースからのDNAの回収

P.114
「実験1」 TEによる希釈法の概略

P.114
「実験2」凍結法の概略

P.115
「実験3」フェノール法の概略

P.115
6.4 塩基配列の解析

P.115
「実験」ポリアクリルアミドゲル電気泳動によるシーケンスの概略

P.117
7章 PCR

P.121
7.1 PCR

P.121
「実験」 PCRの概略

P.121
7.2 PCRを利用した遺伝子のクローニング

P.125
「実験1」保存配列を利用したクローニングの概要

P.125
「実験2」インバースPCRの概要

P.127
8章ハイブリダイゼーション

P.129
8.1 プローブの作製

P.129
「実験1」 PCRを利用したプローブの作製の概略

P.129
「実験2」 RNAプローブの作製の概略

P.130
コラムバクテリオファージと真核生物のRNAポリメラーゼ

P.131
8.2 サザンハイブリダイゼーション

P.132
「実験」ゲノミックサザンハイブリダイゼーションの概略

P.132
8.3 ノザンハイブリダイゼーション

P.136
「実験」ノザンハイブリダイゼーションの概略

P.137
コラムホルムアルデヒドによるタンパク質の固定

P.140
コラムグルタルアルデヒドはタンパク質を架橋する

P.141
8.4 in situハイブリダイゼーション

P.143
「実験」 in situハイブリダイゼーションの概略

P.143
コラム DNAマイクロアレイ

P.146
9章制限酵素と宿主大腸菌

P.148
9.1 制限酵素を利用する遺伝子組換え操作

P.148
コラム制限酵素の生物学的役割

P.153
9.2 遺伝子操作に用いられる大腸菌株の遺伝子型

P.153
コラム DNAメチル化部位の解析

P.155

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第III部応用的な実験操作の原理

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第III部応用的な実験操作の原理

P.159
10章 PCRの応用

P.160
10.1 PCRを利用した全長cDNAの単離

P.160
「実験1」 3′RACEの概略

P.160
「実験2」 5′RACEの概略

P.162
「実験3」 5′キャップを利用した完全長cDNAライブラリー作製法の概略

P.164
「実験4」 5′キャップを利用した5′末端cDNAのクローニングの概略

P.169
コラムキャップとポリ ( A ) の役割

P.170
10.2 PCRを応用した変異の導入と組換え

P.171
「実験1」点突然変異導入の概略

P.171
「実験2」挿入変異導入の概略

P.172
「実験3」欠失変異導入の概略

P.173
「実験4」組換え法の概略

P.174
10.3 PCRを応用した遺伝子発現の定量

P.176
「実験1」半定量Q - PCRの概略

P.176
「実験2」リアルタイム - PCRの概略

P.178
「実験3」新生RNAの定量の概略

P.180
11章 cDNAを用いたタンパク質合成

P.182
11.1 組換えタンパク質合成に用いられるプラスミドの構造

P.182
11.2 cDNA組換えタンパク質合成

P.183
「実験1」大腸菌によるcDNA組換えタンパク質合成の概略

P.183
「実験2」組換えタンパク質の回収と精製の概略

P.187
12章ゲノムの解析

P.190
12.1 ゲノム解析のためのDNA抽出

P.190
「実験」 DNA抽出の概略

P.190
12.2 リプレイスメントベクター

P.192
「実験」ゲノムライブラリー作製法の概略

P.193
12.3 BACベクター

P.195
「実験」 BACライブラリー作製法の概略

P.195
12.4 BACクローンのスクリーニング

P.199
「実験1」コロニーハイブリダイゼーション法の概略

P.199
「実験2」 PCRスクリーニング法の概略

P.199
コラムゲノムプロジェクトとBAC

P.202
13章遺伝子発現の解析

P.203
13.1 目的のcDNAを網羅的に得る方法

P.203
「実験1」ディファレンシャルスクリーニング法の概略

P.203
「実験2」サブトラクションライブラリー法の概略

P.205
13.2 真核細胞への遺伝子導入法

P.206
「実験1」リン酸カルシウム法の概略

P.207
「実験2」リポフェクション法の概略

P.207
「実験3」顕微注入法の概略

P.208
「実験4」エレクトロポレーション法の概略

P.208
「実験5」パーティクルガン法の概略

P.209
「実験6」アグロバクテリウム法の概略

P.209
「実験7」ウイルスベクター法の概略

P.210
コラムレトロウイルスの逆転写プライマー

P.216
「実験8」導入遺伝子が染色体に組み込まれた細胞の選別法の概略

P.220
13.3 転写調節領域の解析

P.222
「実験」レポーター融合遺伝子の発現量の定量の概略

P.222
13.4 転写因子の検出と結合配列の解析

P.223
「実験1」ゲルシフト分析の概略

P.224
「実験2」フットプリント法の概略

P.225

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